PhysSandbox

Михаэлис–Ментен: K_m по Лайнуиверу–Бёрку

Неизвестный фермент. Снимайте начальную скорость v при нескольких [S] и найдите K_m из фита Лайнуивера–Бёрка 1/v от 1/[S].

Университет / научные· 24 мин·Похожий симулятор: ХимияКинетика Михаэлиса–Ментен

Цель работы

Определить K_m из v = V_max [S] / (K_m + [S]). На графике 1/v от 1/[S] отрезок равен 1/V_max, наклон — K_m/V_max, значит K_m = наклон / отрезок.

Оборудование

  • Неизвестный фермент
  • Субстрат
  • Анализ начальной скорости

Эксперимент

Теория

Лайнуивер–Бёрк линеаризует Михаэлиса–Ментен. Стенд прячет K_m, V_max и готовую двойную обратную прямую. Меняете только [S]. Анализ даёт v после записи. Оценивается K_m (характерный масштаб субстрата), не V_max.

Ход работы

  1. Фермент неизвестен. Меняете только концентрацию субстрата [S].
  2. Запишите. Анализ заносит начальную скорость v с малым шумом. Живых v, K_m и прямой Лайнуивера–Бёрка нет.
  3. Таблица считает 1/[S] и 1/v. Берите точки по обе стороны ожидаемого масштаба K_m (примерно 0,5–20).
  4. Повторите не менее чем для 6 концентраций.
  5. Аппроксимируйте 1/v от 1/[S]; K_m = наклон / отрезок. Сравните с эталоном.

Вывод

Найденная K_m согласуется со скрытой константой фермента. Основные погрешности: шум анализа и вес малых v на графике Лайнуивера–Бёрка.