Michaelis–Menten : K_m par Lineweaver–Burk
Enzyme inconnue. Relevez la vitesse initiale v à plusieurs [S] et déterminez K_m par l’ajustement de Lineweaver–Burk de 1/v en fonction de 1/[S].
Objectif
Déterminer K_m à partir de v = V_max [S] / (K_m + [S]). Sur le graphe 1/v en fonction de 1/[S], l’ordonnée à l’origine vaut 1/V_max et la pente K_m/V_max, d’où K_m = pente / ordonnée à l’origine.
Matériel
- Enzyme inconnue
- Substrat
- Analyse de la vitesse initiale
Expérience
Théorie
La représentation de Lineweaver–Burk linéarise Michaelis–Menten. Le banc cache K_m, V_max et toute droite des doubles inverses déjà tracée. Ne faites varier que [S]. L’analyse donne v après l’enregistrement. On évalue K_m (échelle caractéristique en substrat), pas V_max.
Mode opératoire
- L’enzyme est inconnue. Réglez uniquement la concentration de substrat [S].
- Relevez la vitesse initiale v : l’analyse l’enregistre avec un léger bruit. Il n’y a ni v, ni K_m, ni droite de Lineweaver–Burk en direct.
- Le tableau calcule 1/[S] et 1/v. Prenez des points de part et d’autre de l’échelle attendue de K_m (environ 0,5–20).
- Recommencez pour au moins 6 concentrations.
- Ajustez 1/v en fonction de 1/[S] ; K_m = pente / ordonnée à l’origine. Comparez à la valeur de référence.
Conclusion
La K_m trouvée s’accorde avec la constante cachée de l’enzyme. Principales incertitudes : bruit de l’analyse et poids des faibles v sur le graphe de Lineweaver–Burk.