Michaelis-Menten: K_m nach Lineweaver-Burk
Unbekanntes Enzym. Messen Sie die Anfangsgeschwindigkeit v bei mehreren [S] und bestimmen Sie K_m aus der Lineweaver-Burk-Ausgleichsgeraden 1/v gegen 1/[S].
Ziel des Versuchs
K_m aus v = V_max [S] / (K_m + [S]) bestimmen. Im Diagramm 1/v gegen 1/[S] ist der Achsenabschnitt gleich 1/V_max, die Steigung gleich K_m/V_max, also K_m = Steigung / Achsenabschnitt.
Geräte
- Unbekanntes Enzym
- Substrat
- Messung der Anfangsgeschwindigkeit
Versuch
Theorie
Lineweaver-Burk linearisiert die Michaelis-Menten-Gleichung. Der Aufbau blendet K_m, V_max und eine fertige doppelt-reziproke Gerade aus. Ändern Sie nur [S]. Die Messung liefert v nach dem Speichern. Bewertet wird K_m (die charakteristische Substratskala), nicht V_max.
Durchführung
- Das Enzym ist unbekannt. Ändern Sie nur die Substratkonzentration [S].
- Speichern Sie. Die Messung trägt die Anfangsgeschwindigkeit v mit kleinem Rauschen ein. Es gibt keine laufende Anzeige von v, K_m oder der Lineweaver-Burk-Geraden.
- Die Tabelle berechnet 1/[S] und 1/v. Nehmen Sie Punkte beiderseits der erwarteten K_m-Skala (etwa 0,5–20).
- Wiederholen Sie das für mindestens 6 Konzentrationen.
- Bestimmen Sie die lineare Ausgleichsgerade 1/v gegen 1/[S]; K_m = Steigung / Achsenabschnitt. Vergleichen Sie mit dem Referenzwert.
Schlussfolgerung
Die bestimmte K_m stimmt mit der verborgenen Enzymkonstante überein. Wesentliche Unsicherheiten: Rauschen der Messung und die Gewichtung kleiner v-Werte im Lineweaver-Burk-Diagramm.