P50 da hemoglobina pela curva de dissociação
pH / T / pCO₂ padrão. Registre S em vários pO₂ e determine o P50 pela linearização de Hill: ln(S/(1−S)) em função de ln pO₂.
Objetivo
Determinar o P50 a partir de S = pO₂ⁿ / (P50ⁿ + pO₂ⁿ). O gráfico de ln(S/(1−S)) em função de ln pO₂ tem ordenada na origem −n ln P50, logo P50 = exp(−ordenada na origem / coeficiente angular).
Materiais
- Câmara de tonometria de sangue
- Oxímetro
- Regulador de pO₂
- Padrão de pH / T / pCO₂
Experimento
Teoria
O gráfico de Hill é linear em coordenadas logarítmicas. A bancada oculta o P50 efetivo, n e o rótulo «deslocamento à direita/esquerda». As condições são as padrão (pH 7,40, 37 °C, pCO₂ 40 mmHg), de modo que se obtém o P50 habitual do adulto.
Procedimento
- Anote: pH, temperatura e pCO₂ estão fixos nos valores padrão. O P50 está oculto. Ajuste só o pO₂.
- Registre a saturação S (fração). Acrescenta-se um pequeno ruído. Não há P50 ao vivo.
- Anote: na tabela já se calculam ln(S/(1−S)) e ln pO₂. Tome pontos com S aproximadamente entre 0,15 e 0,85.
- Repita para pelo menos 6 tensões de oxigênio, aproximadamente de 12 a 70 mmHg.
- Ajuste a reta do gráfico de Hill; P50 = exp(−ordenada na origem / coeficiente angular). Compare com o valor de referência.
Conclusão
O P50 encontrado coincide com o valor adulto padrão oculto. As principais incertezas: ruído do oxímetro e a idealização da equação de Hill.